Вода апирогенная

Методы получение апирогенной воды: сепарации паровой фазы от капельной, ультрафильтрование. Для депирогенизации натрия хлорида перед приготовлением инъекционных растворов его предварительно подвергают термической стерилизации в открытой стеклянной или фарфоровой посуде при 180оС в течение 2 часов; толщина слоя порошка не должна превышать 6-7 см, а срок использования – 24 часов. Для стерилизации растворов фильтрованием используют мембранные фильтры с порами 0,22 и 0,3 мкм.

Контроль апирогенности воды determinátio apyrogénitis áquae [лат. determináre] – определение в исследуемой воде пирогенов - веществ липополисахаридной природы с большим молекулярным весом (100000-1000000 Да). Методы контроля апирогенности воды: -Гель-гидроксидный метод идентификации пирогенобразующих микроорганизмов в исследуемых растворах по реакции образования геля при взаимодействии с 3% раствором калия гидроксида. -Качественный фармакологический тест на кроликах. Согласно ГФ XI раствор лекарственного средства считают непирогенным, если при его парентнральном введении сумма повышений температуры у трех кроликов меньше или равна 1,4oС. Если эта сумма превышает 2,2oС, то препарат считают пирогенным. Когда сумма повышения температуры у трех кроликов находится в пределах от 1,5o до 2,2oС испытание повторяют дополнительно ещё на пяти кроликах. Препарат считают непирогенным, если сумма повышений температуры у всех восьми кроликов не превышает 3,7oС. Если же эта сумма равна 3,8oС или больше, препарат считают пирогенным. Стоимость одного такого анализа составляет около 100 000 руб. -ЛАЛ-тест (Лимулус-тест, лим-тест), основанный на способности Лизата Амебоцитов Amebocyte lysate (клеток крови) краба мечехвоста Limulus polyphemus специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий – липополисахаридами; при их взаимодействии происходит помутнение прозрачной реакционной смеси или образование твердого геля (тромбообразование), что и служит индикатором присутствия эндотоксина в реакционной смеси. Впервые ЛАЛ-тест как официнальный фармакопейный метод введен в Фармакопею США в 1985 г. (USP-20). В России тест используют с октября 1997 г. Тест высокоспецифичен по отношению к эндотоксинам грамотрицательных бактерий. Чувствительность его во много раз превышает чувствительность фармакологического теста на кроликах. Кроме того могут использоваться химические, спектрофотометрический и полярографический методы. Растворы, содержащие пирогены, после обработки хиноном показывают отрицательную реакцию с тетрабромфталеином, дают, хотя и слабовыраженный, максимум поглощения при длине волн 260 нм, оказывают сильное подавляющее действие на полярографический максимум кислорода. См. подробнее ГФ XII. -Физические методы: полярографический, люминисцентный и на основе измерения электропроводности. Люминисцентный метод – определение пирогенов с помощью люминесцентных приборов, например, типа «Флюорат - 02 АВФФ-ДХ». -Метод ЦКК - метод оценки пирогенности воды на основе цельных культур крови (ЦКК), чувствительный в отношении как грамотрицательных, так и грамположительных эндотоксинов. Применяют также химические цветные реакции с калия перманганатом в кислой среде при нагревании до кипения и с железа хлоридом и калия феррицианатом.

Пирогены; Стерилизация.